Concentración de pigmentos en nuestros pimientos

En una entrada anterior publicábamos los valores de las lecturas en el espectrofotómetro de los extractos alcohólicos de los pimientos. A partir de ellas, y mediante las fórmulas que se muestran a continuación podréis calcular las concentraciones de pigmentos. Es necesario tener en cuenta las diluciones, en el caso de que las hayamos hecho.

Clorofila a (μg/mL) = 13,36 x A664 - 5,19 x A649

 Clorofila b (μg/mL) = 27,43 x A649 - 8,12 x A664

Carotenoides totales (μg/mL) = [1000 x A470 - 2,13 x (Clorofila a) - 97,64 x (Clorofila b)] /209

Aunque es recomendable que realicéis los cálculos vosotros mismos, os adelanto los resultados mediante estos gráficos.

Concentración de clorofila A, clorofila B y carotenoides en pimientos de la variedad peonza, entreverados y maduros y tratados con agua y melatonina.

Concentración de clorofila A, clorofila B y carotenoides en pimientos de la variedad riojana, entreverados y maduros y tratados con agua y melatonina.

Concentración de clorofila A, clorofila B y carotenoides en pimientos de la variedad yellow, entreverados y maduros y tratados con agua y melatonina.

Es momento de analizar los resultados. Para una mejor comparación se ha aplicado en todas las gráficas la misma escala vertical. ¿Cómo varía la concentración de pigmentos según las variedades? ¿Y entre los estados entreverado y maduro? ¿Se puede sacar alguna conclusión respecto a los tratamientos con melatonina en comparación con los controles con agua? Con todos estos análisis ya podemos ir sacando conclusiones para nuestro trabajo final. Compartid vuestros análisis en los comentarios.

Contenido estimado de vitamina C de nuestros pimientos

 Como presumíamos a partir de la determinación de vitamina C que realizamos a nuestros pimientos era posible que hubiese un error en el valor de una de nuestras muestras, concretamente la de pimientos yellow maduros tratados con agua. Se ha repetido el experimento, y los volúmenes de lugol añadidos, utilizando 0,5 mililitros de extracto de pimiento, se han corregido, siendo la tabla que sigue la que consideramos definitiva.

 A partir de los valores promedio, y utilizando la curva patrón que sigue, podemos calcular la cantidad de vitamina C o ácido ascórbico que hay en nuestros pimientos. Lo explicábamos en otro de los blogs de nuestros proyectos sobre pimientos, a cuya entrada podéis acceder desde este enlace. Los cálculos los dejamos para vosotros; animaos en los comentarios.

Pero no es cuestión de mantener durante mucho tiempo la incertidumbre, así que os ofrecemos un adelanto con la representación gráfica de los resultados, donde podréis comparar las variaedades estudiadas y los tratamientos ensayados.

 

¿Qué opináis de los resultados que hemos obtenido? ¿Tienen todas las variedades de pimientos la misma cantidad de ácido ascórbino? ¿Hay alguna tendencia en los resultados para los distintos pimientos, estados de maduración o tratamientos? Estas y otras más son las preguntas que os debéis plantear y que tenéis que responder en los comentarios.

Medimos el contenido en pigmentos fotosintéticos en los pimientos

El pasado viernes tuvimos nueva sesión del proyecto, en este caso dedicada a valorar la cantidad de clorofila a, clorofila b y carotenos en nuestros pimientos. El jueves preparamos los extractos triturando 0,6 gramos de pimiento en 12 ml de etanol; las muestras se dejaron macerando en el frigorífico y al día siguiente se procedió centrifugar los extractos a 5000 rpm durante 5 minutos y se estudió la absorbancia con la ayuda del espectrofotómetro. Las medidas se hicieron a 470 nm, a 649 nm y a 665 nm. En algunos casos fue necesario diluir el extracto pues la concentración era demasiado elevada para la sensibilidad del instrumento. La tabla muestra las lecturas y las diluciones a las que se hicieron. Para cada pimiento se tomaron tres medidas, a las que se hallará el valor medio que será utilizado para los cálculos con las ecuaciones de Pompelli.

 

¿Os atrevéis a hacer los cálculos? Es fácil; es solo cuestión de aplicar las ecuaciones y las diluciones. Puesto que matemáticamente las ecuaciones son lineales, podemos suponer que la absorbancia -en el caso de que se haya hecho dilución-  es el valor observado multiplicado por el factor de dilución. Tened en cuenta que para el pimiento riojano entreverado tratado con agua, todas las medidas se han hecho diluyendo a 1/4 (incluidas los valores de absorbancia a 649 nm y a 665 nm). Esto se ha debido a que he tuve que repetir las medidas por un error en la dilución).

Pasamos las plántulas de las placas de cultivo a macetas

Esta mañana hemos tenido una nueva sesión del proyecto con nuestros investigadores. Tras varias semanas con las plántulas de pimiento creciendo en placa ha llegado el momento de pasarlas a maceta para que continúen el desarrollo. Lo hemos hecho solo para los pimientos picantes porque en los dulces va muy lento del desarrollo de las plántulas. 

Teníamos dos lotes iniciales de pimientos picantes, uno control -tratado con agua- y otro en el que las semillas habían sido tratadas con melatonina. Las plantas de cada uno de estos se han dividido en dos, uno que será tratado con agua mientras que la otra mitad se tratará más adelante con melatonina. Por tanto, tendremos:

- 1 lote de plantas control tratadas inicialmente con agua y posteriormente también con agua. 

- 1 lote de plantas control tratadas inicialmente con agua y que serán tratadas posteriormente con melatonina. 

- 1 lote de plantas tratadas inicialmente con melatonina y tratadas con agua posteriormente. 

- 1 lote de plantas tratadas inicialmente con metalonina y que volverán a ser tratadas más adelante con este compuesto.

 Se ha procedido a abrir las placas y a extraer con mucho cuidado las plántulas, se han puesto en agua y posteriormente se han transferido a macetas con sustrato y vermiculita, previamente regadas. Cada maceta se ha etiquetado en función de sus tratamientos. Posteriormente se han colocado en unos dispositivos que semejan invernaderos a pequeña escala donde se desarrollarán las plantas. Se mantendrán a temperatura ambiente y con iluminación natural.

Las siguiente fotos ilustran el proceso:

 

 

 

 

 

 

  

Determinación de vitamina C. Volúmenes de lugol añadidos.

El pasado viernes iniciamos los experimentos para determinar el contenido de vitamina C (ácido ascórbico) de nuestros pimientos. Nos dio tiempo a preparar los extractos en un medio con tampón TRIS-ClH y a titular con el lugar a seis de ellos.  Los seis restantes se congelaron y se valoraron el pasado lunes. A continuación se muestra la tabla con las cantidades de lugol añadidas:

A partir de los valores medios y aplicando la curva patrón que en su momento preparamos es momento de calcular las concentraciones de vitamina C en nuestros pimientos. No olvidéis, a efectos de cálculos, que hemos hecho la determinación en volúmenes de 0,5 ml de extracto de pimientos.

Es ahora momento de valorar estos resultados y de ver si hay diferencias en el contenido de ácido ascórbico entre pimientos entreverados y maduros, o entre los tratados con agua y con melatonina. Aunque hay un dato que como hemos comentado en clase nos ha sorprendido y parece fuera de toda lógica y es el valor tan alto, comparado con los otros estados y tratamientos que tienen los pimientos yellow maduros tratados con agua. 

Me gustaría hacer algunas puntualizaciones que podrían resultar útiles para la interpretación de los resultados. La primera es que, a diferencias con otros proyectos de años anteriores en los que trabajábamos con solo un pimiento por experimento, en este caso tenemos mezclados trozos de varios pimientos (al menos en las variedades de las que teníamos más ejemplares); en segundo lugar que el estado de los pimientos era muy diferente según la variedad, de modo que el que más se deterioró fue el yellow; cuando los procesé hube de retirar algunos trozos porque estaban muy alterados.  Y como siempre, no olvidéis hacer vuestros análisis en forma de comentarios.

El estado de nuestras plántulas el 14 de febrero de 2025

Tras recibir las imágenes con el estado de las plantas en la Estación Experimental del Zaidín, mostramos aquí las fotos de las nuestras el día 14 de febrero.

El estado de las plántulas en la EEZ

Como recordaréis, se hicieron dos lotes de cultivos en placa con los pimientos dulces y picantes. Uno de ellos se llevó a la Estación Experimental del Zaidín y el estado de las plántulas es el que muestran las imágenes siguientes, enviadas por Marichu Campos.